以检测HIV为例说明Western印迹

免疫印迹法又称印迹法。它将凝胶电泳与固相免疫结合，把电泳分区的蛋白质转移至固相载体，再用酶免疫、放射免疫等技术测定。该法能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子量，常用于检测多种病毒的抗体或抗原。例如，该法检测血清HIV抗体为HIV感染的确诊实验之一。第一步将HIV用离子去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）裂解病毒结构蛋白，然后用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE将分子大小不同的蛋白质分开，这一方法简称SDS-PAGE。第二步，将电泳分离的病毒蛋白质转印到硝酸纤维素膜上（电转印法）。第三步，将硝酸纤维素膜浸于待检血清中，若血清含HIV抗体，即与膜上的相应病毒蛋白抗原结合，洗涤去除未结合的抗体，再加酶标记的二抗，最后加底物显色。