E.coli在一般液体培养时，细胞浓度可达( )。

A.2×10⁷

B.2×10⁸

C.2×10⁹

D.2×10¹⁰

提问人：网友anonymity 发布时间：2022-01-06

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第1题

打算将一个cDNA克隆到一个表达载体，以便在E.coli中大量制备相应的蛋白质。这个cDNA的两侧具有BamH Ⅰ的位点，因此计划将它从BamH Ⅰ的位点插入载体中。实验严格地按照克隆手册中的方法进行：载体用BamH Ⅰ切割以后，立即用碱性磷酸酶处理除去5'磷酸；接着将处理过的载体同用BamH Ⅰ切割的cDNA片段混合，加入DNA连接酶后进行温育，连接之后，将DNA同已处理过的可以接受DNA的细菌感受态细胞混合。最后，将混合物涂布在加有抗生素固体培养基的平板上。由于载体上带有抗生素的抗性基因，所以，转化的细菌能够存活。

实验中同时设置了四个对照：

对照1：将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上。

对照2：将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。

对照3：将经切割(但未用碱性磷酸酶处理)并用连接酶连接(但没有cDNA片段)的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。

对照4：将经切割(并用碱性磷酸酶处理过)并用DNA连接酶连接(但没有cDNA片段)的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。

在进行第一次实验时，感受态细胞不是自己制备的，结果在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落(表Q25.2)。在第二次实验中，自己制备感受态细胞，但这一次，所有的平板上都没有菌落生长(表Q25.2)。接着又进行了第三次实验，这次得到了转化子(表Q25.2)。从实验平板上挑出12个菌落，分离了质粒DNA，并用BamH Ⅰ进行切割，其中9个克隆产生大小同载体一样的单一的一条带，另三个克隆中切出一个cDNA片段，实验终于获得成功。

表Q25.2 cDNA克隆的结果

制备的样品	实验结果
制备的样品	1	2	3
对照1 只有细胞	TMTC	0	0
对照2 未切的载体	TMTC	0	＞1000
对照3 省去磷酸酶处理，无cDNA	TMTC	0	435
对照4 无cDNA	TMTC	0	25
实验样品	TMTC	0	34