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[主观题]

λYES（酵母一大肠杆菌穿梭载体)是构建cDNA文库的高效载体，这种载体是噬菌体基因组与一个在大肠杆菌和酵母中

λYES(酵母一大肠杆菌穿梭载体)是构建cDNA文库的高效载体，这种载体是噬菌体基因组与一个在大肠杆菌和酵母中都能复制的质粒巧妙结合而成，它兼有病毒和质粒载体的优点。cDNA被插入载体的质粒部分，然后它能在体外被包装入病毒颗粒中，包装起来的载体感染大肠杆菌的效率比质粒本身要高得多。一旦进入了大肠杆菌，λYES中的质粒序列能够被诱导重组出基因组，并进行独立复制，这就可以从质粒中分离出来，以便进行进一步的遗传操作。

为了最大限度地提高克隆效率，载体用只有一个切点的限制性内切核酸酶Xho Ⅰ(5'-C↓TCGAG)进行切割，然后在dTTP存在的情况下，同DNA聚合酶一起进行温育。将一种具有平末端的双链cDNA同一段含由两段寡聚核苷酸组成的双链寡聚核苷酸接头连接起来，这两段寡聚核苷酸的序列是：5'-CGAGATTTACC和5'-GGTAAATC，它们的5'端都是磷酸。然后将载体和cDNA混合并连接在一起。采用这种方法用2μg的载体和0.1μg的cDNA，构建了一个有4×10⁷个克隆的cDNA文库。问：

提问人：网友anonymity 发布时间：2022-01-06

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因为表达载体中含有抗性基因，能表达抵制抗生素的酶，所以只有含有载体的大肠杆菌才可以在含有抗生素的培养皿上生长，而未被转化的细菌则因受到抗生素的抑制而死掉。

你还参照实验手册做了下面四组对照：

对照一、在含有抗生素的培养皿上面涂布未被转化的(即不含有载体的)大肠杆菌感受态细胞(cells alone)。

对照二、用未被酶切的载体直接转化大肠杆菌感受态细胞，将产物涂布在含有抗生素的培养皿上面(vector alone)。

对照三、用BamHI酶切载体DNA后，不用碱性磷酸酶处理，不需要cDNA，直接加入DNA聚合酶，然后转化、涂板(Omit phosphatase，omit eDNA)。

对照四、除使用碱性磷酸酶外，其它与对照三相同(Omit cDNA)。

你一共做了三次实验，在第一次中所有的平板中都长出很多细菌。在第二次实验中所有的平板中都没有长细菌。在第三次实验中你得到了较好的结果，转化成功，具体克隆数见下表：

Preparation of Sample		NO.of Colonies
		NO.of Colonies			1	2	3
		Control 1	Ceils alone	TMTC	0	0
Control 2	Uneut vector	TMTC	0	＞1000
Control 3	Omit phosphatase，omit cDNA	TMTC	0	435
Control 4	Omit CDNA	TMTC	0	25
Experimental sample		TMTC	0	34
TMTC=too many to count

请回答下列问题：

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