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[单选题]
含目的基因质粒转化农杆菌感受态细胞后的阳性克隆鉴定方法有（）
A.仅用抗性筛选方法
B.含相应抗性培养基平板筛选后挑取单克隆进行菌落PCR鉴定
C.抗性平板筛选后挑取单克隆进行测序
D.互补法鉴定
提问人：网友boylove1
发布时间：2022-01-07
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第2题
假设你需要将一段cDNA克隆到表达载体中并转化到大肠杆菌中。cDNA的两端和载体上均有BamHⅠ的酶切位点，你需要用BamHⅠ切割eDNA和载体然后将它们连接在一起。下面是实验方法要求的具体步骤：a．用BamHⅠ处理载体DNA，然后用碱性磷酸酶去除5'端的磷酸基；b．用BamHⅠ处理cDNA，然后与步骤a中得到的载体DNA混合，加入DNA聚合酶，在适当的条件下使cDNA与载体连接；C．将步骤b的产物转入大肠杆菌感受态细胞中，培养后均匀涂在含有抗生素的琼脂培养皿上。
因为表达载体中含有抗性基因，能表达抵制抗生素的酶，所以只有含有载体的大肠杆菌才可以在含有抗生素的培养皿上生长，而未被转化的细菌则因受到抗生素的抑制而死掉。
你还参照实验手册做了下面四组对照：
对照一、在含有抗生素的培养皿上面涂布未被转化的(即不含有载体的)大肠杆菌感受态细胞(cells alone)。
对照二、用未被酶切的载体直接转化大肠杆菌感受态细胞，将产物涂布在含有抗生素的培养皿上面(vector alone)。
对照三、用BamHI酶切载体DNA后，不用碱性磷酸酶处理，不需要cDNA，直接加入DNA聚合酶，然后转化、涂板(Omit phosphatase，omit eDNA)。
对照四、除使用碱性磷酸酶外，其它与对照三相同(Omit cDNA)。
你一共做了三次实验，在第一次中所有的平板中都长出很多细菌。在第二次实验中所有的平板中都没有长细菌。在第三次实验中你得到了较好的结果，转化成功，具体克隆数见下表：
| Preparation of Sample | NO.of Colonies | |||
| 1 | 2 | 3 | ||
| Control 1 | Ceils alone | TMTC | 0 | 0 |
| Control 2 | Uneut vector | TMTC | 0 | ＞1000 |
| Control 3 | Omit phosphatase，omit cDNA | TMTC | 0 | 435 |
| Control 4 | Omit CDNA | TMTC | 0 | 25 |
| Experimental sample | TMTC | 0 | 34 | |
| TMTC=too many to count | ||||
请回答下列问题：
第6题
B细胞在骨髓分化发育中进行发育的意义有（）。
A、BCR基因重排产生多种B细胞克隆
B、通过阳性选择实现MHC限制性
C、通过阴性选择实现自身耐受性
D、BCR功能性成熟
E、形成B细胞库
第8题
大肠埃希菌转化实验中，出现假阳性克隆的原因可能有( )
A．载体自身环化效率过高
B．琼脂平板上的抗生素失活或含量过低
C．载体DNA与插入片段的分子比率过高
D．抗生素的浓度过高
E．感受态细胞失活
