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[主观题]

试述采用E.coli表达有用的蛋白质必须使构建的表达载体具备哪些主要条件。

提问人:网友anonymity 发布时间:2022-01-06
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第1题
打算将一个cDNA克隆到一个表达载体,以便在E.coli中大量制备相应的蛋白质。这个cDNA的两侧具有BamH Ⅰ的位点,因此计划将它从BamH Ⅰ的位点插入载体中。实验严格地按照克隆手册中的方法进行:载体用BamH Ⅰ切割以后,立即用碱性磷酸酶处理除去5'磷酸;接着将处理过的载体同用BamH Ⅰ切割的cDNA片段混合,加入DNA连接酶后进行温育,连接之后,将DNA同已处理过的可以接受DNA的细菌感受态细胞混合。最后,将混合物涂布在加有抗生素固体培养基的平板上。由于载体上带有抗生素的抗性基因,所以,转化的细菌能够存活。

实验中同时设置了四个对照:

对照1:将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上。

对照2:将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。

对照3:将经切割(但未用碱性磷酸酶处理)并用连接酶连接(但没有cDNA片段)的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。

对照4:将经切割(并用碱性磷酸酶处理过)并用DNA连接酶连接(但没有cDNA片段)的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。

在进行第一次实验时,感受态细胞不是自己制备的,结果在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落(表Q25.2)。在第二次实验中,自己制备感受态细胞,但这一次,所有的平板上都没有菌落生长(表Q25.2)。接着又进行了第三次实验,这次得到了转化子(表Q25.2)。从实验平板上挑出12个菌落,分离了质粒DNA,并用BamH Ⅰ进行切割,其中9个克隆产生大小同载体一样的单一的一条带,另三个克隆中切出一个cDNA片段,实验终于获得成功。

表Q25.2 cDNA克隆的结果

制备的样品

实验结果

1

2

3

对照1 只有细胞

TMTC

0

0

对照2 未切的载体

TMTC

0

>1000

对照3 省去磷酸酶处理,无cDNA

TMTC

0

435

对照4 无cDNA

TMTC

0

25

实验样品

TMTC

0

34

注:TMTC=too many to count,多到无法计数。

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第2题
玉米的蛋白质主要是E.
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第3题
下列哪些是蛋白质溶液的稳定因素

A、粘度

B、水化膜

C、α螺旋结构

D、异性电荷

E、同性电荷

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第4题
病人在使用不同药品时有不同的使用方法,有的需要口服,有的需要注射,系统通过建立()字典来保证系统的高效率运行。

A、医嘱项目

B、执行频率

C、给药方式

D、医嘱项目分类

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第5题
蛋白质在生物体中的作用有哪些?
A.大多数酶是蛋白质,参与催化生物体内的代谢过程

B.运输营养物质

C.控制细胞生长、分化

D.细胞的结构成分和机械支持物

E.接受和传递信息

F.防御保护作用

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第6题
染色质的主要成分包括______。

A、核酸和蛋白质

B、RNA和组蛋白

C、DNA和非组蛋白

D、组蛋白与非组蛋白

E、DNA与组蛋白

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第7题
稳定DNA双螺旋的主要因素是:

A、氢键

B、碱基堆积力

C、DNA与组蛋白的结合

D、与Mn2+ 、Mg2+的结合

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第8题
蛋白质的营养功能有 、 、 。
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第9题
为什么质粒可以用作基因工程的载体?
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第10题
重组DNA技术在医学上可用于哪些方面?
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