在重组DNA操作中为了提高连接效率常常将非互补的黏性末端修饰成平末端之后再进行连接。请问将黏性末端变为平端的方法有哪些？

A.不匹配的粘末端可通过部分填补后连接。

B.同聚尾法连接不仅连接效率高，也易回收插入的片段。

C.限制酶切割DNA后加入EDTA-SDS终止液抑制限制酶活性，将有利于重组连接。

D.Mg2+-ATP是T4DNA连接酶反应时的必须因素。

E.平末端连接时，在反应体系中加入适量凝聚剂可提高连接效率。

λYES(酵母一大肠杆菌穿梭载体)是构建cDNA文库的高效载体，这种载体是噬菌体基因组与一个在大肠杆菌和酵母中都能复制的质粒巧妙结合而成，它兼有病毒和质粒载体的优点。cDNA被插入载体的质粒部分，然后它能在体外被包装入病毒颗粒中，包装起来的载体感染大肠杆菌的效率比质粒本身要高得多。一旦进入了大肠杆菌，λYES中的质粒序列能够被诱导重组出基因组，并进行独立复制，这就可以从质粒中分离出来，以便进行进一步的遗传操作。

为了最大限度地提高克隆效率，载体用只有一个切点的限制性内切核酸酶Xho Ⅰ(5'-C↓TCGAG)进行切割，然后在dTTP存在的情况下，同DNA聚合酶一起进行温育。将一种具有平末端的双链cDNA同一段含由两段寡聚核苷酸组成的双链寡聚核苷酸接头连接起来，这两段寡聚核苷酸的序列是：5'-CGAGATTTACC和5'-GGTAAATC，它们的5'端都是磷酸。然后将载体和cDNA混合并连接在一起。采用这种方法用2μg的载体和0.1μg的cDNA，构建了一个有4×10⁷个克隆的cDNA文库。问：

你在一种高效的克隆载体λYES(酵母一大肠杆菌中穿梭)中构建了一个cDNA文库，这种载体是由细菌噬菌体λ基因和一种可在大肠杆菌和酵母中复制的质粒重组而成，它结合了病毒和质粒克隆载体的优点。cDNA可以插入到载体的质粒部分，这样就可以在体外被包装进一个病毒衣壳，包装后的载体感染E.coli比质粒自身更有效，一旦进入E.coli，在λYES中的质粒序列可诱导脱离λ基因组进行重组并可自我复制，这就使cDNA在质粒上与λ分离，这就有利于以后的操作。

为了使克隆效率最大，载体和cDNA均用特殊的方法加以制备，在载体DNA单一独特的XhoI位点切割(5'-CTCGAG)后在dTTP存在下与DNA多聚酶一起孵育，一个制备好的钝端cDNA与一个双链寡核苷酸接头连接，这个接头由两个寡核苷酸5'-CGAGATTTACC和5'-GGTAAATC组成，其5'-末端均有磷酸基团，然后DNA和cDNA混匀并进行连接。这个方案证实非常有效，用2μg载体和0.1mg cDNA，你可以得到4×10⁷重组分子组成的文库。

A.高速级

B.中速级

C.低速级

D.都可以

A.缩小网络中的广播域，减少出现广播的概率

B.网络分层合理，二三层各自收敛，提高收敛速度和网络稳定性

C.合理设计二层网络规模，减少网段分配，提高网络管理效率

D.接入设备可以使用二层设备，减少网络建设成本

E.可以充分利用STP和VRRP的冗余机制，提高网络的可靠性

A.为基因水平的细胞工程

B.又称为重组DNA技术或基因重组技术

C.离不开限制性核酸内切酶

D.是改造某种生物体细胞基因组的有效手段

E.操作时常将目的基因和载体用不同的内切酶切割以获得粘性末端

A.缩小网络中的广播域，域少出现广播风暴的概率。

B.网络分层合理，二三层各自收敛，提高收敛速度和网络稳定性。

C.合理设计二层网络规模，减少网段分配，提高网络管理效率。

D.接入设备可以使用二层设备，減少网络建设成本。

E.可以充分利用STP和VRRP的冗余机制，提高网络的可靠性